ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ OPISTHORCHIS FELINEUS
Ключевые слова:
выделение ДНК, постановка ПЦР, экстрагирующий буфер, СТАВ-буфер, фенол-хлороформный метод, половозрелая марита, молекулярно-генетическая диагностика, трематоды, описторхоз, амплификацияАннотация
В данной статье приведены результаты эффективности применения модифицированного СТАВ-метода для выделения ДНК из половозрелой формы марит Opisthorchis felineus. Описанный метод применим для получения образцов с высокой чистотой и концентрацией ДНК (30-35 нг/мкл) и её использования для постановки ПЦР анализа со специфическими
праймерами рибосомального (ядерного) генома ITS2 (Internal Transcribed Spacer). В статье рассмотрены наиболее распространенные методы выделения ДНК: СТАВ-метод, метод выделения ДНК с помощью экстрагирующего буфера с предварительной гомогенизацией,выделение ДНК с помощью готового набора «Биосилика», которыепредлагаютсядля более высокого выхода ДНК из трематод. Данные методы являются основными,которые используются при работе с трематодами, однако выход и чистота ДНК, получаемая этими тремя методами различна. Так, в основе методов лежат физические и химические воздействия на объект, что способствует денатурации клеточных нуклеаз. В ходе исследований были подобраны оптимальные концентрации растворов и проведены модификации всех трех методовдля наилучшего выхода ДНК. Кроме этого, был разработан протокол выделения ДНК и подобрана программа для постановки ПЦР анализа.
